游离酸是四甲基联苯胺，熔点168-171°C，主要用于作为过氧化氢酶底物用在ELISA反应中，该底物能产生可溶性淡蓝色的末端产物，能在370或620-650nm用分光光度计读取。TMB反应可以用2MH2SO4(产生黄色)终止，并能在450nm读取。因此TMB是测定血液、检测血红素（hemoglobin）和过氧化物酶的灵敏和特定试剂。