菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，从每个稀释液中分别取出1毫升置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后，一般为48小时。记录每个平皿中形成的菌落数量。依据稀释倍数，计算出每克原始样品中所含细菌菌落总数。

基本操作一般包括：样品的稀释、倾注平皿、培养48小时、计数报告。

国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。