磷酸烯醇丙酮酸是生物细胞中的常见生化分子，是糖解作用与糖质新生作用的中间产物。

在糖解作用中，此分子是2-磷酸甘油酸在烯醇化酶的催化下生成，是一个高能磷酸分子。接下来磷酸烯醇丙酮酸将会进入糖解作用的第10个，也是最后一个步骤中。

在糖解作用的最后步骤里，磷酸烯醇丙酮酸将会经由丙酮酸激酶的催化，使原本接在氧原子上的磷酸根转移到ADP上，进而生成ATP以及丙酮酸。这个反应会放出大量的能量，是一个难逆的反应。此外，这个反应也需要钾离子与镁离子的参与。